NY_T 3313-2018 生乳中β-内酰胺酶的测定
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ID： |
44C3B15C3A214575A165F500F14F008D |
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文件大小(MB)： |
1.05 |
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页数： |
9 |
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文件格式： |
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日期： |
2024-8-13 |
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ICS 67.100.10,X 16 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3313—2018,生乳中P ー内酰胺酶的测定,Determination of p-lactamase in raw milk,2018-12-19 发布 2019-06-01 实施,中华人民共和国农业农村部 发布,NY/T 3313-2018, 1 Z ■ -1—,刖 后,本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草,本标准由农业农村部畜牧兽医局提出,本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC 274）归ロ,本标准起草单位:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业农村部奶产品质量安全风险评估实验,室（北京）、农业农村部奶及奶制品质量监督检验测试中心（北京）,本标准主要起草人:郑楠、刘慧敏、屈雪寅、王加启、李松励、杨晋辉、赵晨、文芳、祝杰妹、叶巧燕,NY/T 3313-2018,生乳中口ー内酰胺酶的测定,1范围,本标准规定了生乳中广内酰胺酶测定的杯碟法和胶体金快速试纸条法,本标准适用于生牛乳、生羊乳、生水牛乳中ル内酰胺酶的测定,本标准第一法检出限为生牛乳4,U/mL0,ハ生羊乳3 U'm』生水牛乳1 U/mL;第二法检出限为4,2规范性引用文件「皿/,下列文件对于本文件的仅注,引用,GB/T 6682 /分析砍验莒山,305,3原理,采用对:,为对照,比有,酰胺酶,4试剂或材料,除非另有J,4. 1 水:GB/二,以青霉素作,4.2 磷酸盐缓冲液（,溶液（0. 1 mol/ DijMoFte駐〇 .定答至1第,],4.3 生理盐水（8.5》/L）:称取国由§氯化船,ヤ,4.4 菌悬液:将试验需株 灌黄微最苗（丒地丁渡’“、磅蟠豳MCC工，51.又名嗜根考克氏菌,（Kocuria rhizophiレ）C1E 1例皿?請于营餐嘉酒培养^^8甕而匕空生化培养箱（5. 1）培养,18 h.24 h,用生理盐水（4. 3）弄下菌物为菌悬液。菌悬液浓，度川）匕跖测定,在450 nm测量其200,.溶解于水中,用盐酸,ア min,倍稀释液,吸光度值约为〇. 89,即终浓E为1 菌悬液现用现配,4. 5 Rー内酰胺酶标准溶液（4 000 U/mL）:用磷酸盐缓冲液（4. 2）将8ー内酰胺酶标准品（300万U/mL）,制备成浓度为4 000 U/mL的标准溶液。现用现配,4. 6舒巴坦标准溶液（1 mg/mL）:准确称取10 mg（精确至0. 1 mg）舒巴坦标准物质,用磷酸盐缓冲液,（4. 2）溶解并定容至10 mL。现用现配,4. 7青霉素标准溶液（0. 1 mg/mL）:准确称取10 mg（精确至0. 1 mg）青霉素参考标准物质（Penicillin,G Sodium,青霉素G钠盐）,用磷酸盐缓冲液（4. 2）溶解并定容至100 mLo现用现配,4. 8营养琼脂培养基:见附录A中的A. 1,4.9抗生素检定培养基!!:见A. 2,1,NY/T 3313-2018,5仪器设备,5. 1生化培养箱:土 1℃,5.2 高压灭菌锅,5.3 光度计:450 nm,5.4 pH计:精确至0.1,5. 5 移液器:1 mL,2OO mL,1O mL0,5. 6天平:感量0.1 mg,5.7恒温水浴锅：±1℃,5. 8抑菌圈测量仪或游标卡尺:精确至0. 01 mmo,5. 9 牛津杯:不锈钢小管,外径(8. 〇 + 〇, l)mm,内径(6. 0士0. 1)mm,高度(10. 0±0. l)mm0,5. 10培养皿:内径90mm,5. 11 离心管:1.5 mL,6样品,样品应按NY/T 3051—2016中3. 4. 5规定的要求冷藏或冷冻保存,恢复室温后进行测定,7试验步骤,7. 1检验用平板的制备,将菌悬液(4. 4)按适当比例加入灭菌后冷却至(46±1)℃的抗生素检定培养基D(4. 9)中,充分摇匀,后制备菌体数量约为1X108 CFU/mL的含菌培养基;取15 mL.20 mL含菌培养基倒入无菌培养皿,(5. 10),凝固后备用,7.2试样的测定,各取1. 00 mL充分混匀的生乳于4个1. 5 mし离心管(5. 11)中,分别标为A、B、C、D。每个样品平,行试验2个。同时,用灭菌水作空白试验。按照表1依次分别加入ル内酰胺酶标准溶液(4. 5)、舒巴坦,标准溶液(4. 6)、青霉素标准溶液(4. 7)0混匀后,取A.D试样各200丛L分别加入到放置于检验用平,板(7. 1)上的4个牛津杯(5. 9)中,平板加盖后放入(37±1)ヰ生化培养箱(5.1)中培养!8 h.22 h,测量,各抑菌圈直径,取2个平行测定结果的平均值,表1试样的添加,离心管编号Bー内酰胺酶标准溶液舒巴坦标准溶液青霉素标准溶液,A — 一5ML,B 一25 mL 5ML,C 25 mL 一5mL,D 25 mL 25 mL 5,8试验数据处理,8. 1空白试验结果,对样品结果进行判定时,空白试验结果应同时满足以下条件：,a) 2次平行测定应同时满足A、B、D均产生抑菌圈;,b) 2次平行测定应同时满足A与B的抑菌圈差异03 mm；,c) 2次平行测定应同时满足C的抑菌圈小于D的抑菌圈,差异＞3 mm,2,NY/T 3313-2018,8.2结果判定,当空白试验结果满足8.1时,样品结果应按以下规则进行判定:,a）若B和D均产生抑菌圈,且C的抑菌圈小于D的抑菌圈,差异＞3 mm时:,1）A的抑菌圈小于B的抑菌圈,2次平行测定同时满足抑菌圈差异＞3 mm时,该结果判定,为检出8ー内酰胺酶;,2） 2次平行测定同时满足A的抑菌圈与……
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